如何正確解凍、存放胎牛血清?
2024-12-20胎牛血清是細胞培養中常用的天然培養基,因為胎牛未進食過母乳,所以 IgG 含量低,且含有豐富的細胞生長必須的營養成分,故目前多數實驗人員選擇的都是胎牛血清進行動物細胞的體外培養,具有極為重要的功能。
? 提供對維持細胞指數生長的激素,基礎培養基中沒有或量很少的營養物,以及主要的低分子營養物。 ? 提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調變它們所結合的物質活力。 ? 有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到解毒作用。 ? 是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。 ? 起酸堿度緩沖液作用。 ? 提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。 |
血清存放和解凍是實驗中必備的操作。今天帶大家一起來看下如何解凍和存放血清?
一. 如何儲存和解凍血清?
未拆封的血清,一般情況下應存放于-10℃至-20℃,在產品規定的效期內均可使用,若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至合適大小的無菌離心管內,再放回冷凍。
將血清從冷凍冰箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融,或通過水浴鍋促使其溶解。但必須注意的是,融解過程中必須規則地搖晃均勻。完全溶解后建議盡快使用,若長時間儲存在2-8℃,血清中的各種(脂)蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能因凝集而形成沉淀或可見的混濁。
二. 解凍后發現有絮狀沉淀物,該怎么處理?
胎牛血清中沉淀物的出現有許多種原因,但最普遍的原因是由于胎牛血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在胎牛血清解凍后,也會存在于胎牛血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響胎牛血清本身的質量。若欲去除這些絮狀沉淀物,可以將胎牛血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。
解凍胎牛血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若胎牛血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產生沉淀物。解凍胎牛血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。請勿將胎牛血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,胎牛血清會變得混濁,同時胎牛血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響胎牛血清的質量。胎牛血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。若必須做胎牛血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。
三. 如何避免血清中產生沉淀?
1.解凍時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一;
2.分裝凍存時,須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡);
3.切勿由-20℃直接至37℃水浴鍋解凍,較大的溫差,易造成蛋白質凝結而發生沉淀;
4.切勿將血清置于37℃過長時間,否則可能使之渾濁,其中一些不穩定的組分也會因此受到影響,最終降低血清的品質;
5.血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟;
6.若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且保持搖晃均勻。溫度過高、時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。