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Roche基因組學系列:RT-PCR / RT-qPCR產品

2025-05-08

逆轉錄酶PCR(RT-PCR)是PCR的一種變體,除PCR試劑外還需采用逆轉錄酶來擴增特定mRNA序列。通過一條引物退火合成第一鏈從而形成cDNA拷貝后,通過PCR/qPCR合成dsDNA。
一步法
在一步法 RT-PCR/RT-qPCR中,逆轉錄酶步驟與 PCR反應在同一管中進行,便于在單孔中對靶基因和對照進行多重分析。一步法反應易于構建,可最大限度縮短實操時間以減少人為錯誤和污染可能,通常被視作高通量篩選最佳選擇。這種方法同樣非常適合重復執行小量檢測的工作流程。
轉錄子一步法RT-PCR試劑盒
轉錄子一步法RT-PCR試劑盒包含四種不同的酶,用于快速、靈敏、特異的RNA終點法分析。轉錄子逆轉錄酶可確保靈敏穩健的逆轉錄,同時保證高產量。Protector RNA酶抑制劑可在逆轉錄過程中最大限度保護模板,而ExpandTM系統(由TaqDNA聚合酶和校對聚合酶組成的混合物)可最大限度避免突變,從而為PCR提供高產量和高保真度。
●可檢測低至1 fg的總RNA
●包含出色的RNA酶抑制劑,在高溫下具有完全活性
●專有的熱啟動緩沖液,可實現高特異性并減少引物二聚體形成

                                                              
                                                                                高靈敏度轉錄復雜模板。
(A)使用轉錄子一步法RT-PCR試劑盒逆轉錄不同量(低至1fg)的HeLa總RNA。根據試劑盒標準RT-PCR實驗方案(+50°C逆轉錄30分鐘),使用針對人類28S核糖體RNA的特異性引物(GC含量64%)擴增389bp片段。瓊脂糖凝膠電泳和溴化乙錠染色后獲得的清晰條帶,證明該試劑盒可高靈敏度轉錄極少量(1 fg)的模板。
Titan? 單管RT-PCR系統


轉錄子一步法RT-PCR試劑盒包含四種不同的酶,用于快速、靈敏、特異的RNA終點法分析。轉錄子逆轉錄酶可確保靈敏穩健的逆轉錄,同時保證高產量。Protector RNA酶抑制劑可在逆轉錄過程中最大限度保護模板,而ExpandTM系統(由TaqDNA聚合酶和校對聚合酶組成的混合物)可最大限度避免突變,從而為PCR提供高產量和高保真度。
●靈敏、快速和可重復的RNA分析
●與Taq DNA聚合酶相比,保真度高三倍
●高效率酶帶來出色靈敏度
兩步法
在兩步法 PCR 中,首先通過逆轉錄產生 cDNA,然后將其加入PCR 反應。這種高度靈敏技術的每個步驟都依賴于單獨的優化緩沖液,通常建議需要最佳逆轉錄和 PCR 性能的反應使用。兩步法 PCR 可保存 cDNA 供將來使用,常用于研究每個樣品中的多個靶標。

                                                                          
                                                                       在常規PCR儀上通過兩步法RT-PCR檢測小鼠β-肌動蛋白mRNA。
轉錄子逆轉錄酶
轉錄子逆轉錄酶推薦用于長靶標(最大14kb)、稀有靶標和富含GC的序列,且由于其適用于多種修飾的核苷酸,也可用于制備標記cDNA。該酶可用于高靈敏度的兩步法RT-PCR,適用于常規PCR儀和實時PCR儀器。
●生成含大插入片段的cDNA文庫
●可在高溫(最高65°C)下使用
●適于在 cDNA合成過程中標記Cy3、Cy5、DIG、生物素和氨基烯丙基
逆轉錄酶AMV
作為禽成髓細胞瘤病毒RNA基因組的基因產物,逆轉錄酶AMV 的成熟形式包含RNA定向DNA 聚合酶、DNA 依賴性DNA聚合酶、RNaseH、以及解旋活性。該酶可用于cDNA合成、后續擴增反應的第一鏈cDNA合成、雙脫氧 DNA測序、RNA測序、DNA片段3'末端標記、以及基因組足跡 ss 探針合成。
●適用于多種應用
●可用于具有復雜二級結構的轉錄本
●經cDNA合成和RT-PCR功能測試
轉錄子通用cDNA預混液
轉錄子通用cDNA預混液包含一種獨特的寬溫范圍酶,適于高溫逆轉錄一一即使面對復雜RNA模板,也可表現出高特異性和靈敏度。兩步法PCR所需的所有試劑均在兩個小管中提供,最大限度減少了移液步驟。該產品結合RealTime? ready 細胞裂解試劑盒使用時,可直接用于細胞裂解液。
● 輕松構建反應,僅需添加RNA
●兼容高達65°C的孵育溫度
●適用于低至0.1 pg的靶標總RNA量
用于RT-PCR的cDNA第一鏈合成試劑盒 (AMV)


cDNA第一鏈合成試劑盒適用于序列特異性引物、poly(dT)15引物或隨機引物,可用于生成cDNA的第一條鏈,從而作為兩步法RT-PCR的起始反應。禽成髓細胞瘤病毒(AMV)逆轉錄酶具有很高的熱穩定性,可在42°C下進行反應,從而具有更高的特異性和二級結構分辨率。
●熱穩定酶可增強二級結構的分辨率
●兼容序列特異性引物、poly(dT)15引物或隨機引物
●可以與PCR結合使用,以檢測是否存在RNA病毒

貨號      品名
TOSRTRO           轉錄子一步法RT-PCR試劑盒
11855476001         Titan?單管RT-PCR系統
TRANSRTRO      轉錄子逆轉錄酶
10109118001        逆轉錄酶AMV
05893151001        轉錄子通用cDNA預混液
11483188001        用于RT-PCR的cDNA第一鏈合成試劑盒(AMV)


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